0 просмотров
Рейтинг статьи
1 звезда2 звезды3 звезды4 звезды5 звезд
Загрузка...

Методы микробиологической диагностики гриппа

ЧАСТНАЯ МИКРА. Частная микра

26. Вирус гриппа. Морфология, репродукция, антигенное строение. Эпидемиология и патогенез. Иммунитет. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика и лечение.

Грипп [от фр. gripper, хватать], или инфлюэнца [от итал. influenza di freddo, влияние холода], — острая инфекция, проявляющаяся поражениями дыхательного тракта, непродолжительной лихорадкой, упадком сил, головной болью, миалгиями и др.

Резервуар гриппа — инфицированный человек (больные и бессимптомные носители). Больной становится заразным за 24 ч до появления основных симптомов и представляет эпидемическую опасность в течение 48 ч после их исчезновения.Грипп регистрируют повсеместно, рост заболеваемости наблюдают в холодные месяцы. Эпидемии гриппа развиваются с интервалом 2-3 года.

Передача возбудителя гриппа происходит воздушно-капельным путём. Наиболее восприимчивы дети и лица преклонного возраста. Вирусы гриппа чувствительны к действию высоких температур, высушиванию, инсоляции и УФ-облучению. Также они лабильны к действию эфира, фенола, формальдегида и других веществ, денатурирующих белки.

Морфология вирусов гриппа

Вирусы гриппа — овальные «одетые» вирусы; вирионы часто имеют неправильную форму; их средний размер составляет 80-120 нм. Геном образован однонитевой молекулой -РНК, состоящей из 8 отдельных сегментов. Нуклеокапсид организован по типу спиральной симметрии.

Суперкапсид вируса гриппа образован липидным бислоем, который пронизывают гликопротеиновые шипы (спикулы), определяющие гемагглютинирующую (Н) либо нейраминидазную (N) активность. Репликация ортомиксовирусов первично реализуется в цитоплазме инфицированной клетки; синтез вирусной РНК происходит в ядре.

• Гемагглютинин обусловливает проникновение вирусов гриппа в клетки в результате слияния с мембраной клетки и мембранами лизосом. AT к нему обеспечивают защитный эффект. Нейраминидаза распознаёт и взаимодействует с рецепторами, содержащими N-ацетилнейраминовую кислоту, то есть приводит к проникновению вируса, а также, отщепляя нейраминовую кислоту от дочерних вирионов и клеточной мембраны, к выходу вирусов из клеток.

• Семь сегментов вирусного генома кодируют структурные белки, восьмой — неструктурные белки NS1 и NS2 вируса гриппа, существующие только в инфицированных клетках. Основные из них — матриксный (М) и нуклеопротеидный (NP) белки. В меньших количествах присутствуют внутренние белки (P1, P2, Р3), участвующие в этапах транскрипции и репликации вируса гриппа.

• М-белок вирусов гриппа играет важную роль в морфогенезе вирусов и защищает геном, окружая нуклеокапсид. Белок NP выполняет регуляторные и структурные функции. Внутренние белки являются ферментами: Р1 — транскриптаза, Р2 — эндонуклеаза, Р3 — репликаза.

Антигенная структура вируса гриппа. Антигены вируса гриппа. Антигенный дрейф, антигенный шифт вируса гриппа. Типовые антигены вирусов гриппа типа А — гемагглютинин и нейрамшшдаза; на сочетании этих белков основана классификация вирусов гриппа.
В частности, у вируса гриппа А выделяют 13 антигенов различных типов гемагглютинина и 10 типов нейраминидаз. Антигенные различия среди вирусов гриппа типов А, В и С определяют различия в структурах NP- и М-белков. Все штаммы вирусов типа А имеют групповой (S-) антиген, выявляемый в РТГА. Типоспецифические антигены вирусов гриппа — гемагглютинин и нейраминидаза; варьирование их структуры приводит к появлению новых серологических вариантов, часто в динамике одной эпидемической вспышки.

Изменения антигенной структуры вируса гриппа могут происходить двумя путями:

Антигенный дрейф вируса гриппа. Вызывает незначительные изменения структуры антигенов, обусловленные точечными мутациями. В большей степени происходит изменение структуры гемагглютинина. Дрейф развивается в динамике эпидемического процесса и снижает специфичность иммунных реакций, развившихся в популяции в результате предшествующей циркуляции возбудителя.

Антигенный шифт вируса гриппа. Вызывает появление нового антигенного варианта вируса, не связанного либо отдалённо антигенно-родственного ранее циркулирующим вариантам. Предположительно антигенный шифт происходит в результате генетической рекомбинации между штаммами вируса человека и животных либо латентной циркуляции в популяции вируса, исчерпавшего свои эпидемические возможности. Каждые 10-20 лет происходит обновление популяции людей, но иммунная «прослойка» исчезает, что приводит к формированию пандемий.

После проникновения в клетку сердцевины вируса неполная нить ДНК – генома достраивается.

Формируется полная двунитевая ДНК и созревающий геном попадает в ядро клетки.

В ядре клеточная ДНК-зависимая РНК – полимераза синтезирует разные иРНК (для синтеза вирусных белков) и РНК – прегеном – матрицу для репликации генома вируса.

Далее иРНК перемещаются в цитоплазму и транслируются с образованием белков вируса. Белки сердцевины вируса собираются вокруг прегенома.

На матрице пре-генома синтезируется минус- нить ДНК с помощью РНК – зависимой ДНК – полимеразы вируса.

На образовавшейся минус- нити ДНК синтезируется плюс- нить ДНК.

На Hbs – содержащих мембранах эндоплазматической сети или аппарата Гольджи формируется оболочка вируса.

Вирион выходит из клетки эндоцитозом. Цикл репродукции вируса гриппа продолжается 6-8 часов. Зараженная клетка погибает не сразу и может продуцировать несколько тысяч вирионов.

Вирус гриппа избирательно поражает эпителий респираторного тракта (преимущественно трахеи). Размножаясь в клетках цилиндрического эпителия, вызывает их дегенеративные изменения, используя содержимое эпителиальных клеток для построения новых вирусных частиц. Массированный выход зрелых вирусных частиц нередко сопровождается гибелью эпителиальных клеток, а некроз эпителия и связанное с этим разрушение естественного защитного барьера приводит к вирусемии. Токсины вируса гриппа вместе с продуктами распада эпителиальных клеток оказывают токсическое действие на сердечно-сосудистую, нервную (центральную и вегетативную) и другие системы организма. Гриппозная инфекция приводит к подавлению иммунитета, а при внедрении вторичной бактериальной флоры через некротизированную поверхность слизистой оболочки дыхательных путей могут возникнуть различные осложнения.

В патогенезе гриппа выделяют пять основных фаз патологического процесса:

репродукция вируса в клетках дыхательных путей;

вирусемия, токсические и токсико-аллергические реакции;

поражение дыхательных путей с преимущественной локализацией процесса в каком-либо отделе дыхательного тракта;

возможные бактериальные осложнения со стороны дыхательных путей и других систем организма;

обратное развитие патологического процесса.

В основе поражения различных органов и систем при гриппе ведущую роль играют циркуляторные расстройства, причиной которых являются нарушения тонуса, эластичности и проницаемости сосудистой стенки, прежде всего капилляров. Повышение проницаемости сосудистой стенки приводит к нарушению микроциркуляции и возникновению геморрагического синдрома (носовые кровотечения, кровохарканья, а при тяжелом течении — кровоизлияния в вещество и оболочки головного мозга, в альвеолы, что проявляется синдромом инфекционно-токсической энцефалопатии или геморрагическим токсическим отеком легких).

Грипп обусловливает снижение иммунологической реактивности. Это приводит к обострению различных хронических заболеваний, а также к возникновению вторичных бактериальных осложнений. Наиболее частое и серьезное осложнение гриппа — острая пневмония. В настоящее время общепризнано, что пневмония при гриппе носит смешанный вирусно-бактериальный характер вне зависимости от сроков ее возникновения.

Постоянно действующие факторы неспецифической защиты (клеточные и гуморальные): выделительная функция организма, сывороточные ингибиторы, альфа-интерферон, секреторные IgA.

Факторы индуцированные вирусом (неспецифические — повышение Т тела, и специфические)

Стойкий постинфекционный клеточный и гуморальный иммунитет, который отличается своей узкой типо-, подтипо-, варианто специфичностью и направлен против сероварианта (штамма) вируса гриппа, вызвавшего определенное заболевание.

Поэтому противогриппозный иммунитет является подтипо- и штаммоспецифичным.

Микробиологическая диагностика базируется:

Выделение и идентификация вируса

Определение вирусных АНГ в клетках больного

Поиск вирусоспецифических АНТ в сыворотке больного.

Материал для исследования: носоглоточное отделяемое, мазки – отпечатки со слизистой носа, постмортальное исследование аутопсий

Читать еще:  Менингит вирусный профилактика

Лабораторная диагностика гриппа – раннюю и ретроспективную – проводят для подтверждения клинического диагноза, дифференциации гриппа от ОРВИ другой этиологии и для эпидемиологических целей.

Ранняя диагностика : в первые 3 дня и не позднее 5-го дня болезни обнаруживают АНГ вирусов гриппа с помощью экспресс методов Исследуемый материал: слизь из носовых ходов и носоглотки, взятая тампонами, путем смывов, методом мазков-отпечатков со слизистой нижних носовых раковин, а также секционный материал после их специальной обработки.

Экспресс-диагностика: 2-5 часов, чаще РИФ (прямой и непрямой). Специфические АГ вируса гриппа и внутриклеточные включения выявляют по их яркому изумрудно-зеленому свечению в участках цитоплазмы и ядра инфицированных эпителиальных клеток.

Выделение вируса на куриных эмбрионах:

Проводят комбинированное заражение исследуемым материалом 10-11 дневных эмбрионов в амниотическую и аллантоисную полости. После 3 дней инкубации при t 35С проверяют присутствие вирусов в амниотической и аллантоисной жидкости с помощью РГА с эритроцитами кур, морской свинки или человека, устанавливают титр вируса.

Далее проводится серологическая идентификация выделенного вируса с помощью РСК для определения типовой принадлежности вируса (А, В или С) и РТГА для установления подтипа или штамма вируса гриппа. Реакции ставят с соответствующими диагностическими сыворотками.

Выделение вирусов в культурах клеток

Осуществляется путем заражения нескольких типов культур клеток, чаще используются первичные культуры почек человека и некоторых животных. Клеточные культуры инкубируют в течение недели при Т-33С , ежедневно регистрируя изменения монослоя клеток с целью выявления ЦПД (РТГА, РГА, ИФ-метод). Далее вируссодержащей культуральной жидкостью заражают куриные эмбрионы, получают алантоисную жидкость с высоким содержанием вирусов, и проводят идентификацию выделенного вируса.

Ретроспективная диагностика гриппа (серологическое исследование)

Серологическое исследование парных сывороток, взятых в начале заболевания и через 7-14 дней. Повышение титра специфических АНТ в течение заболевание не менее, чем в 4 раза (у детей младшего возраста – в 2 раза) позволяют установить точную этиологию гриппа.

Цельновирусные вакцины (1-го поколения) – инактивированные и живые.

Расщепленные – сплит вакцины (2-го поколения), содержат внутренние и наружные АНГ вирусов гриппа и не содержат липидов, удаленных после обработки вирионов растворителями или детергентами.

Субъединичные вакцины (3-го поколения) являются наиболее очищенными, содержат наружные H- и N-антигены вирусов гриппа

Ее проводят во время эпидемического подъема заболеваемости. Различают плановую профилактику, организуемую в детских учреждениях, рабочих коллективах и очаговую в семьях гриппозных больных. Для экстренной профилактики применяют противовирусные препараты, иногда проводят иммуноглобулинпрофилактику.

Для лечения гриппа применяют противовирусные препараты:

Препарата интерферона (вирус гриппа А + антитоксическое действие при гриппе В)

Ремантадин (вирус гриппа А +В) ингибирует синтез М-белка, что приводит к нарушению цикла репродукции и препятствует формированию полноценных вирионов.

Арбидол и амиксин, являются индукторами интерферонов и иммуномодуляторами, которые воздействуют на все типы вирусоа гриппа

При тяжелых формах гриппа в первые 3 дня болезни показано введение противогриппозного иммуноглобулина.

Симптоматическое лечение. При наличии бактериальных осложнений назначают антибиотики и сульфаниламиды.

Микробиологическая диагностика гриппа и других ОРЗ

Материалами для микробиологической диагностики гриппа и других ОРЗ являются мазки из пораженных органов, носоглоточные смывы, соскобы с конъюнктивы, кровь, спинномозговая жидкость, испражнения и образцы, полученные при аутопсии.

Материал для микробиологического исследования следует забирать в оптимальные сроки. К моменту появления первых симптомов заболевания содержание возбудителей в патологическом материале максимально и сохраняется на достаточном уровне всего несколько дней. Пробы для исследования забирают с соблюдением правил асептики, даже если материал сам по себе не является стерильным (фекалии и др.). Рекомендуется использовать стеклянные флаконы или посуду из нетоксичной пластмассы с завинчивающейся пробкой.

Многие возбудители нестойки по внешней среде, поэтому пробы следует сохранять влажными и на холоду, но не замораживать. Для сохранения жизнеспособности вирусов исследуемый материал погружают в стабилизирующую среду, состоящую из раствора Хенкса или гидролизата лактальбумина, обогащенных 5-10% прогретой сыворотки крупного рогатого скота. Для подавления роста сопутствующей микрофлоры к указанным выше растворам добавляют 500 ЕД/мл пенициллина, 200-300 мг/мл стрептомицина и 100-200 ед/мл нистатина.

Носоглоточное отделяемое берут натощак. Больному предлагают прополоскать горло10 мл изотонического раствора хлорида натрия и собрать смыв в широкогорлую банку. Ватными тампонами протирают носовые ходы и заднюю стенку глотки и помещают их в банку со смывом. В лаборатории тампоны отжимают о стенку сосуда и удаляют, а смыв центрифугируют или отстаивают в холодильнике. Для выделения вирусов используют надосадочную жидкость.

Соскобы с конъюнктивы забирают платиновой петлей и делают мазок на предметном стекле. Для выделения возбудителей материал забирают тампоном и помещают его в транспортную среду.

Кровь для серологического исследования берут из вены в объеме 10 мл не менее двух раз: на 1-2 сутки и на 10-20 дни болезни. Если нет уверенности в стерильности сыворотки, то ее лучше заморозить, так как это предотвращает рост контаминирующей микрофлоры и сохраняет специфические антитела, титр которых при длительном хранении при плюсовой температуре может снижаться. Спинномозговую жидкость исследуют при подозрении на менингит или энцефалит.

Пробы фекалий массой 4-8 г помещают в сухой стерильной флакон.

Трупный материал следует забирать как можно раньше, так как титр возбудителей в тканях после смерти падает очень быстро. От трупов берут кусочки легкого, трахеи, бронхов, кишечника, регионарные лимфатические узлы и помещают в стерильную посуду.

Взятые тем или иным способом образцы патологического материала транспортируют в лабораторию в термоконтейнерах, в которых поддерживается температура 2-4 о С. Доставка проб в лабораторию должна осуществляться в максимально короткий срок.

Микробиологическое исследование материалов от больных гриппом и ОРЗ (Приложение 1) включает в себя методы экспресс- и серологической диагностики, а также выделение возбудителей на культурах клеток, куриных эмбрионах, лабораторных животных и питательных средах с последующей идентификацией их на основании комплекса морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических и антигенных признаков.

Методы экспресс-диагностики позволяют получить предварительный ответ в течение нескольких часов с момента поступления проб в лабораторию. С этой целью чаще всего используются реакция иммунофлуоресценции (РИФ) и иммуноферментный анализ (ИФА). Для обнаружения некоторых возбудителей (аденовирусы, реовирусы, хламидии и др.) применяют методы гибридизации нуклеиновых кислот (МГНК) и полимеразной цепной реакции (ПЦР). Для обнаружения внутриклеточных включений при хламидийной инфекции мазки из патологического материала окрашивают по методу Романовского-Гимзе.

Для выделения возбудителей гриппа и других ОРЗ из полученного от больных патологического материала заражают культуры клеток, куриные эмбрионы и лабораторных животных, а также производят посев на питательные среды. После первичного заражения для увеличения концентрации возбудителей проводят 1-3 дополнительных пассажа, а затем осуществляют их идентификацию на основе иммунологических методов исследования (РИФ, РТГА, РН и др.). Результативность методов выделения возбудителей варьирует в широких пределах. Чаще всего положительные результаты могут быть получены в период эпидемических вспышек.

Серологические исследования являются наиболее распространенными методами диагностики гриппа и других ОРЗ в связи с их относительной простотой и доступностью для большинства микробиологических лабораторий. В основе этих методов лежит обнаружение увеличения титров специфических антител в динамике инфекции с помощью различных иммунологических реакций. Особенностью серологических методов исследования является получение результатов спустя 10-20 суток с момента начала заболевания. Вместе с тем, методы биологического обогащения исследуемого материала (заражение культур клеток и др.), несмотря на их сложность, в целом ряде случаев не позволяют получить ответ в более короткие сроки. Чаще всего применяют реакции связывания комплемента (РСК), торможения гемагглютинации (РТГА), нейтрализации (РН) и иммуноферментный анализ. Для постановки реакций используют стандартные антигенные диагностикумы, снабженные наставлением по применению. Диагностическое значение имеет обнаружение четырехкратного и более увеличения титра специфических антител к возбудителю инфекции при исследовании полученных от больного парных сывороток.

Читать еще:  Методы вакцинации против гриппа

Тайны вирусов

. тысячи лет идет эта тихая невидимая война человека и вирусов.

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ГРИППА

Преследует цель подтвердить вирусную природу заболевания и определить тип и разновидность вызвавшего его вируса. Это осуществляется посредством:

а) выделения от больного вируса-возбудителя;

б) определения наличия сдвига противогриппозных антител в сыворотке переболевшего гриппом;

в) обнаружения специфических изменений пли вирусного антигена в мазках-отпечатках, полученных от больных.

Для выделения возбудителя исследуют носоглоточную слизь, получаемую протиранием задней стенки глотки ватным тампоном пли прополаскиванием глотки физиологическим раствором. Предназначенный для исследования материал транспортируют на холоде, исследуют сразу или хранят в замороженном виде при t° -20°, -70°. Для подавления присутствующей в смыве бактериальной флоры материал перед исследованием обрабатывают антибиотиками (400 ЕД пенициллина, 0,4 мг стрептомицина на 1 мл).

Изоляцию вируса из материала проводят путем заражения восприимчивых животных (хорьков, белых мышей, крыс), куриных зародышей или культур тканей (культуры почек эмбрионов человека, почек обезьян). Заражение 10-11-дневных куриных зародышей — наиболее распространенный и чувствительный метод изоляции вируса гриппа. Материал вводят в амниотическую полость при помощи шприца. Зараженные зародыши инкубируют 48-96 час. при t° 35-33°, затем вскрывают. Амниотическую и аллантоисную жидкости исследуют на присутствие вируса при помощи реакции гемагглютинации и используют для повторных пассажей с целью идентификации выделенного вируса. Культуры тканей менее чувствительны для выделения вирусов гриппа.

Рис. 4-6. Изменения слизистой оболочки мягкого неба при гриппе: рис. 4 — первый-второй день болезни; рис. 6 — третий-четвертый день болезни, рис. 6-7-8 день болезни.

Присутствие вируса в культурах тканей обнаруживают по феномену гемадсорбции (приклеивание внесенных в культуру эритроцитов к клеткам), а идентифицируют — по способности той или иной иммунной сыворотки предотвращать появление гемадсорбции, вызванной вирусом.

Во всех случаях, независимо от метода изоляции вируса, диагноз считается подтвержденным вирусологически только в том случае, если полученный штамм вируса может быть сохранен в лабораторных условиях и идентифицирован, а у больного, от которого он выделен, есть прирост антител к выделенному штамму. Определение сдвига противогриппозных антител в сыворотке крови переболевших — надежный, хотя и ретроспективный, метод лабораторной диагностики гриппа. В силу широкого распространения гриппозной инфекции среди населения в крови детей старше 3 лет и взрослых обычно содержатся противогриппозные антитела, поэтому однократное исследование сывороток на уровень антител не может дать достоверных результатов. Исследуют одновременно две пробы сывороток: одну, взятую в остром периоде заболевания, другую — 10-20 дней спустя. Подготовленные сыворотки разводят с двукратным коэффициентом от 1:10 до 1:1280 и каждое разведение смешивают с определенной дозой вируса или вирусного антигена; смесь оставляют на время, необходимое для взаимодействия антитела и антигена, а затем устанавливают титр сыворотки, т. е. предельное разведение, оказавшееся эффективным. Диагностически достоверными считаются те случаи, когда в сыворотке, взятой после выздоровления, титр антител к тому или иному типу и штамму вируса гриппа повысился не менее чем в 4 раза.

В соответствии с тремя типами антител, образующихся при гриппе, используют три серодиагностические реакции: нейтрализации биологической активности вируса (РН), задержки гемагглютинации (РЗГА) и связывания комплемента (РСК). Каждую пару сывороток исследуют с несколькими штаммами господствующих в данное время разновидностей вирусов А и В, а также вирусом С. РН — наиболее достоверный, но и наиболее трудоемкий и дорогостоящий метод определения сдвига антител. В реакции используют по 100-1000 доз активного вируса, а для определения нейтральности смеси вируса с сывороткой заражают восприимчивых животных (мышей, хорьков), куриные зародыши или культуры их хорион-аллантоисных оболочек.

РЗГА — наиболее простой и достаточно специфичный метод учета сдвига антител у переболевших, используемый чаще других. Для удаления неспецифических ингибиторов, нередко содержащихся в сыворотке крови человека, сыворотки прогревают 30 мин. при t° 50°, а также обрабатывают KJO4, фильтратом холерного вибриона, риванолом или двуокисью углерода. При использовании стандартных ингибиторо-резистентных антигенов обработка ограничивается прогреванием. Смесь 0,2 мл каждого разведения сыворотки и 4 АЕ (агглютинирующих единиц) антигена выдерживают 1 час при комнатной температуре пли 18 часов при t° +4°. Удлиненный контакт антигена и сыворотки особенно полезен для выявления антител к неавидным штаммам господствующей в данное время разновидности вируса гриппа А2. По истечении срока инкубации во все разведения и контроль добавляют по 0,4 мл 1% взвеси эритроцитов кур для обнаружения неингибированного вирусного гемагглютинина. Последнее разведение сыворотки, оказавшее полный ингибирующий эффект, принимают за титр. Вируснейтрализующие антитела и антигемагглютинины обладают не только типовой, но и штаммовой специфичностью; поэтому при использовании для серодиагностики РН и РЗГА может быть определен не только тип, но и штаммовая разновидность вируса, вызвавшего заболевание.

РСК используют лишь в модификациях, предусматривающих длительный (18 час.) контакт антигена и антитела на холоде. Если в качестве антигена используют нативные аллантоисные культуры или S-антигены, то этот тест дает представление лишь о типе вируса, вызвавшего заболевание. При использовании V-антиге. а могут быть выявлены сдвиги антител к отдельным штаммам возбудителя гриппа. При наличии небольших количеств сыворотки и необходимости проведения анализа со многими антигенами применяют микрометоды РСК и РЗГА.

К методам ранней диагностики относится обнаружение гриппозных цитоплазматических включений (рис. 3) методом риноцитоскопии. Ранние методы диагностики основаны на обнаружении специфических изменений или специфического антигена в отделяемом верхних дыхательных путей больного. Слизистую оболочку носа и глотки интенсивно протирают ватным тампоном, эмульгируют его в небольшом количестве физиологического раствора и после центрифугирования делают из осадка мазки, которые фиксируют, окрашивают, просматривают в люминесцентном микроскопе. После окраски акридиновым оранжевым в мазках у больных гриппом находят ярко-красные цитоплазматические включения. После окраски мазков антисыворотками, меченными изотиоцианатом флюоресцеина, в препаратах обнаруживают клетки с ярко-зеленым свечением. Меченые антисыворотки используют для ускоренной диагностики при выявлении вируса гриппа в культурах клеток, зараженных материалом от больных. В этом случае специфическое свечение обнаруживается как в ядре, так и в цитоплазме пораженных клеток. Как правило, готовят несколько препаратов, окрашивают их мечеными антисыворотками к разным типам и разновидностям гриппозных вирусов. Тип вируса, вызвавшего заболевание, определяют по антисыворотке, вызвавшей свечение клеток.

Читать еще:  Коротко о гриппе

Рис. 3. Отпечатки с нижней носовой раковины. Характерные для гриппа цитоплазматические включения (указаны стрелкой) в клетках цилиндрического эпителия (окраска по Романовскому — Гимзе).

При аденовирусной инфекции свечение наблюдается только при использовании сывороток к аденовирусам, и светящиеся массы располагаются лишь в зоне ядра. При парагриппозных инфекциях парагриппозная сыворотка соответствующего типа вызывает свечение только цитоплазмы клеток.

Вирусы гриппа и парагриппа, их характеристика. Микробиологическая диагностика, специфическая профилактика.

Возбудители ОРВИ. Вирусы гриппа и парагриппа. Характеристика. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика и лечение.

Таксономия и классификация: РНК-содержащие вирусы. I семейство — Paramyxoviridae включает вирусы парагриппа человека (5 серотипов) и респираторно-синтициальный вирус (PC);

II семейство — Picomaviridae включает 7 серотипов энтеровирусов Коксаки и ECHO, поражающих дыха­тельные пути, и 120 серотипов риновирусов;

III семейство — Reoviridae вклю­чает 3 серотипа, вызывающих заболевания респираторного и желудочно-кишечного трактов;

IV семейство — Coronaviridae включает 3 серотипа, также поражающих дыхательный и желу­дочно-кишечный тракты.

ДНК-содержащие вирусы.V семейство — Adenoviridae. Представители этого семейства поражают глаза, кишечник, мочевой пузырь, 3 типа аденовирусов вызывают ОРВИ.

Структура:. Средние размеры, сфери­ческую, палочковидную или нитевидную формы. Большая часть возбудителей ОРВИ содержит однонитчатую РНК, кроме реовирусов, обладающих двунитчатой РНК, и ДНК-содержащих аденовирусов. Некоторые из них окружены суперкапсидом.

Антигенная структура: слож­ная. У вирусов каждого рода есть общие антигены; вирусы имеют и типоспецифические антигены, по которым можно проводить идентификацию возбудителей с определением серотипа. В со­став каждой группы вирусов ОРВИ входит различное количество серотипов и серовариантов. Большинство вирусов ОРВИ обладает гемагглютинируюшей способностью. РТГА основана на блоки­ровании активности гемагглютининов вируса специфическими антителами.

Культивирование: Оптимальная модель для культивирования— культуры клеток. Для каждой группы вирусов подобраны наиболее чувс­твительные клетки (для аденовирусов —эмбриональные клетки почек; для коронавирусов — эмбриональные клетки и клетки трахеи). В зараженных клетках вирусы вызывают ЦПЭ( цитопатический эффект). Культуры клеток исполь­зуют также при идентификации возбудителей с цитолитической активностью (например, аденовирусов). Для этого применяют так на­зываемую реакцию биологической нейтра­лизации вирусов в культуре клеток (РБН или РН вирусов). В ее основе — нейтрализация цитолитического действия вирусов типоспецифическми антителами.

Иммунитет: вируснейтрализующие специфические IgA (обеспечивают мес­тный иммунитет) и клеточный иммунитет. Местная выработка а-интерферона, появление которого в но­совом отделяемом приводит к значительно­му снижению количества вирусов. Важной особенностью ОРВИ является формирование вторичного иммунодефицита. Постинфекционный иммунитет — нестойкий, непродолжительный, типоспецифический. Большое число серотипов и разнообразие вирусов – высокая частота повторных заболеваний.

Микробиологическая диагностика.Материал для исследования носоглоточная слизь, мазки-отпечатки и смывы из зева и носа.

Экспресс-диагностика.Обнаруживают ви­русные антигены в инфицированных клетках. Применяют РИФ (прямой и непрямой мето­ды) с использованием меченных флюорохромами специфических антител, а также ИФА. Для труднокультивируемых вирусов исполь­зуют генетический метод (ПЦР).

Вирусологический метод.Индикацию вирусов в зараженных лабораторных моделях проводят по ЦПЭ, а также РГА и гемадсорбции (для ви­русов с гемагглютинирующей активностью), по образованию включений (внутриядерные включения при аденовирусной инфекции, цитоплазматические включения в околоядер­ной зоне при реовирусной инфекции и т. п.), а также по образованию «бляшек», и «цветной пробе». Идентифицируют вирусы по анти­генной структуре в РСК, РПГА, ИФА, РТГА, РБН вирусов.

Серологический метод.Противовирусные антитела исследуют в парных сыворотках больного, полученных с интервалом в 10 дней. Диагноз ставят при увеличении тит­ра антител как минимум в 4 раза. При этом определяется уровень IgG в таких реакциях, как РБН вирусов, РСК, РПГА, РТГА.

Лечение: эффективного этиотропного — нет; неспецифическое – а-интерферон, оксолин (глазные капли), при вторичной бактериальной инфекции – антибиотики. Основное лечение – симптоматическое/патогенетическое. Антигистаминные препараты.

Профилактика: неспецифическая – противоэпидемич. мероприятия. Специфической – нет. Для профилактики аденовирусов – пероральные живые тривалентные вакцины.

Вирусы гриппа и парагриппа, их характеристика. Микробиологическая диагностика, специфическая профилактика.

Таксономия: семейство – Orthomyxoviridae, род Influenzavirus. Раз­личают 3 серотипа вируса гриппа: А, В и С.

Структура вируса гриппа А.Возбудитель гриппа имеет однонитчатую РНК, состоящую из 8 фрагментов. Подобная сегментарность позволяет двум вирусам при взаимодействии легко обмениваться генетической информацией и тем самым спо­собствует высокой изменчивости вируса. Капсомеры уложены вок­руг нити РНК по спиральному типу. Вирус гриппа имеет также суперкапсид с отростками. Вирус полиморфен: встре­чаются сферические, палочковидные, нитевидные формы.

Антигенная структура.Внутренние и поверхностные антигены. Внутренние антигены состоят из РНК и белков капсида, представлены нуклеопротеином (NP-белком) и М-белками. NP-и М-белки — это типоспецифические анти­гены. NP-белок способен связывать комп­лемент, поэтому тип вируса гриппа обычно определяют в РСК. Поверхностные антигены — это гемагглютинин и нейраминидаза. Их струк­туру, которая определяет подтип вируса гриппа, исследуют в РТГА, благодаря тор­можению специфическими антителами гемагглютинации вирусов. Внутренний антиген – стимулирует Т-киллеры и макрофаги, не вызывает антителообразования. У вируса имеются 3 разновидности Н- и 2 разновидности N – антигенов.

Иммунитет: Во время заболевания в проти­вовирусном ответе участвуют факторы неспе­цифической защиты: выделительная функция организма, сывороточные ингибиторы, аль­фа-интерферон, специфические IgA в секре­тах респираторного тракта, которые обеспечи­вают местный иммунитет.

Клеточный иммунитет — NK-клетки и специфические цитотоксические Т-лимфоциты, действующие на клетки, ин­фицированные вирусом. Постинфекционный иммунитет достаточно длителен и прочен, но высокоспецифичен (типо-, подтипо-, вариантоспецифичен).

Микробиологическая диагностика.Диагноз «грипп» базируется на (1) выделении и иден­тификации вируса, (2) определении вирусных АГ в клетках больного, (3) поиске вирусоспецифических антител в сыворотке больно­го. При отборе материала для исследования важно получить пораженные вирусом клетки, так как именно в них происходит репликация вирусов. Материал для исследования — но­соглоточное отделяемое. Для определения антител исследуют парные сыворотки крови больного.

Экспресс-диагностика.Обнаруживают ви­русные антигены в исследуемом материале с помощью РИФ (прямой и непрямой вариан­ты) и ИФА. Можно обнаружить в материале геном вирусов при помощи ПЦР.

Вирусологический метод.Оптимальная лабо­раторная модель для культивирования штаммов—ку­риный эмбрион. Индикацию вирусов проводят в зависи­мости от лабораторной модели (по гибели, по клиническим и патоморфологическим изменениям, ЦПД, образованию «бляшек», «цветной пробе», РГА и гемадсорбции). Идентифицируют вирусы по антигенной структуре. Применяют РСК, РТГА, ИФА,РБН (реакцию биологической нейтрализа­ции) вирусов и др. Обычно тип вирусов грип­па определяют в РСК, подтип — в РТГА.

Серологический метод.Диагноз ставят при четырехкратном увеличении титра антител в парных сыворотках от больного, полученных с интервалом в 10 дней. Применяют РТГА, РСК, ИФА, РБН вирусов.

Лечение: симптоматическое/патогенетическое. А-интерферон – угнетает размножение вирусов.

1. Препараты — индукторы эндогенного интерферона.

Этиотропное лечение — ремантидин – препятствует репродукции вирусов, блокируя М-белки. Арбидол – действует на вирусы А и В.

2. Препараты — ингибиторы нейраминидазы. Блокируют выход вирусных частиц из инфицированных клеток.

При тяжелых формах – противогриппозный донорский иммуноглобулин и нормальный человеческий иммуноглобулин для вв введения.

Профилактика: Неспецифическая профилактика – противоэпидемические мероприятия, препараты а-интерферона и оксолина.

Специфическая – вакцины. Живые аллантоисные интраназальная и подкожная, тривалентные инактивированные цельно-вирионные гриппозные интраназальная и парентеральная-подкожная (Грипповак), химические Агриппал, полимер-субъединичная «Гриппол». Живые вакцины создают наиболее пол­ноценный, в том числе местный, иммунитет.

Ссылка на основную публикацию
Adblock
detector